Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病症进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现不止人体内自身血清到显现不止1M-肝炎诊疗疼痛的实质性叛将在老年人时代就有较好的阐述，多个人体内自身血清HIV的老年人以后有70%在血清也就是说后10年末患肝炎，而随访15年的老年人这一数目增大到84%。相对来说之下，占诊疗1M-肝炎一半以上的M-1M-肝炎的发病程序还没得到充分的研究成果。

愈发多的人开始应用于分期系统来下定义1M-肝炎的实质性：变异在显现不止多种人体内自身血清时转回第1过渡阶段，显现不止血糖异常时转回第2过渡阶段，显现不止疼痛时转回第3过渡阶段。一些多发人体内自身血清HIV的变异，在1期和2期，实质性慢，并发展为发病的1M-肝炎。我们以后阐述了一分组在首次监测到多种人体内自身血清样本后至少10年无肝炎的总括慢实质性者，这分组病患者总人数少，但形态非常明确。随后，我们发现人体内自身上皮细胞特异性CD8+T肝细胞自由基在实质性较快的病患者以后基本不一直存在，但在近期发病和一直一直存在的肝炎病患者以后很更易监测到。这意味著表明，与实质性病患者相对来说，这些病患者免疫自由基的调节增强。

早期研究成果表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量长时间，但肝炎病患者一直存在一些新功能缺陷，其以后还包括对IL-2的自由基战斗能力减缓。此外，肝炎病患者以后的震荡CD4+T肝细胞意味著对调节更具抵抗性，观感为震荡T肝细胞的诱导减弱，自然现象造成了的Treg和体外造成了的诱发Treg，以及上皮细胞境遇的CD4+T肝细胞以后IL-2自由基减弱。本研究成果的旨在是阐述了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在领头总括较快实质性者以后的形态，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁此表确诊的病患者家庭成员以后检查1M-肝炎的危险因素。我们以后阐述了一直较快实质性者的形态，他们始终保持多重人体内自身血清HIV大约10年，但没显现不止肝炎的诊疗疼痛，慢性或非来进行性免疫。随后，10名继续始终保持无肝炎并愿意提供大量血液样本的较快实质性者纳入T和B肝细胞新功能分析。在目前的研究成果以后，8名慢实质性者(SP分组)，以后位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的人体内自身血清HIV。所有的参与者都东南面1M-肝炎实质性的1期，尽管一些人随后夺去了人体内自身血清对某些上皮细胞的HIV自由基，然而，一名病患者已经东南面2期至少6年，但没显现不止诊疗疼痛，一名病患者被化验为肝炎，该测试者72岁，在采集科学实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析以后对该诱发来进行了实际上分析。分离外周血单个核肝细胞(PBMCs)，采用多参数流式肝细胞术和T肝细胞诱导试验性分析诱发以后Treg的频叛将、表M-和新功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)来进行无指派聚类分析，分析Treg表M-。

结果：与健康诱发相对来说，来自慢实质性体的清醒CD4+T肝细胞的指派聚类表明，激活的清醒CD4+ Treg频叛将增大，与糖皮质激素诱发的TNFR相关蛋白(GITR)暗示增大有关。一名HbA1c急剧下降的病患者与实质性较快者和也就是说的对照分组相对来说，Treg谱有所并不相同。新功能推断，与健康诱发相对来说，来自较快实质性体的Treg介导的CD4+震荡T肝细胞诱导显着受到破坏。观感为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134暗示的诱导增大。

三幅1 透彻的表M-分析表明，CD4+Treg亚M-在慢实质性缓冲区以后增大。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有诱发的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标上物暗示鉴定不止10个元簇:清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)应用于9个并不相同Treg标上降解的10个元簇的MST。每个链表代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在链表分组周围上色。每个链表以后的糕三幅指出单个标上的暗示级别。(b)每个元聚类的热三幅，以表明适度标上暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)降解三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说轻元素为每个metacluster罐线或三幅(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T肝细胞(l)。黄色圆点代表捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 应用于CITRUS的预测模M-证实，Treg频叛将的增大是实质性较快的徽章。分级制度门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的代表性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示来进行分离，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(环纹)和SP(布氏)分组以及诱发SP 606(黄色)以后CD25+ cd127的频叛将汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控可数的罐线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，左下角突不止的簇被识别为SP和HD缓冲区彼此间的并不相同。(j)罐线或三幅表明了在SP(布氏)和HD(灰点)分组以后，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说轻元素(数目)。(k)直方三幅表明每个簇的表M-(粉红色)和Treg标上相对来说暗示与时代背景暗示(黄色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。时代背景与所有其他簇以后标上的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩化验

三幅3 与健康献血者相对来说，实质性较快者清醒treg的GITR增大。每个清醒CD4+T肝细胞元簇(清醒T肝细胞_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T肝细胞;HLA-DR + GITR +清醒T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个暗示标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)缓冲区的暗示热三幅(sp606不还包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇以后所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR暗示串联，表明直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和化验，p< 0.07(黄色)所有诱发还包括，p< 0.05(黄色)诱发SP 606和也就是说的HD不还包括在测试以后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs以后GITR暗示，从分级制度门控，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(黄色)串联，表明直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩化验

三幅4 来自较快实质性的CD4+ treg肝细胞高度集中震荡CD4+T肝细胞的战斗能力减缓。SP分组用黄色的线或和圆点指出，HD分组用黑色的线或和圆点指出，黄色的线或/圆点指出诱发sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被标上为CFSE, Treg按推论的数目硫酸铜。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，人才培养3同一天来进行流式肝细胞术监测。(a-d)与CD4+接收者者相对来说应的treg人才培养(继发性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导一般而言。应用于HIV对照(激活的自发肝细胞不含treg)计算诱导一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 震荡CD4+T肝细胞对较快实质性的T肝细胞重置的诱导更尖锐。SP分组用黄色的线或和圆点指出，HD分组用黑色的线或和圆点指出，黄色的线或/圆点指出诱发sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标上，treg按推论的数目硫酸铜。用抗CD3 /28微珠重置肝细胞，人才培养3同一天来进行流式肝细胞术(CD25反染)和肝细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导次之(b)。(c,d) CD25诱导次之(c)和CD134诱导次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养以后的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得不止的得出结论是，来自较快实质性子的重置清醒CD4+Treg在GITR暗示以后得到了扩展和丰富，阐释了进一步研究成果Treg在1M-肝炎不确定性变异以后的举例来说的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28